Criptococoma em hemisfério cerebral. 
3. Esfregaços do formol com reservas do material
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Masc., 34 a.  Clique para história clínica, TC, RMespécime macro, histologia de parafina : lâminas escaneadas, HE, PAS, Grocott, mucicarmim; esfregaço do fixador com fungos em suspensão : HE, PAS, Grocott, Giemsa, Papanicolaou, tinta nanquim; microscopia eletrônica. Textos : parede celular e cápsula mucopolissacarídica

Nesta página, mostramos preparados obtidos a partir do formol usado para conservar o espécime depois de fatiado. Ao voltar às reservas para obter mais blocos, constatamos que o líquido tinha consistência viscosa. Fizemos um esfregaço, coramos por HE e verificamos a enorme abundância de parasitas que haviam se desprendido do tecido e estavam em suspensão no líquido.  Nestes preparados os microorganismos estavam inteiros, não em corte. Realizamos as colorações especiais tradicionais, inclusive as normalmente usadas em preparados citológicos, e misturamos uma gota do sobrenadante com tinta nanquim preta (carbono coloidal), que delineia os fungos contra o fundo escuro. 

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HE
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HE, esfregaço.  Cápsulas 'densas'.   Alguns fungos isolados mostravam cápsulas com forte coloração em róseo. Ignoramos o significado do achado. 
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HE, esfregaço.  Fungos em reprodução.
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PAS. 
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PAS.  Fungos em reprodução. 
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Grocott. 
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Grocott.  Fungos em reprodução. 
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Giemsa.
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Papanicolaou. 
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Papanicolaou.  Fungos em reprodução. 
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Nanquim preto. 

Estes preparados examinados sem coloração adicional destacam os fungos contra o fundo negro dado pela tinta Nanquim. Variando a altura do condensador e a abertura do diafragma, é possível visualizar detalhes da estrutura interna dos fungos, melhor que com qualquer dos métodos precedentes. 

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Penetração de nanquim na cápsula.

Em vários fungos, mas não em todos, observamos penetração das partículas de carbono coloidal na cápsula, por vezes formando um halo escuro na parte média da mesma e/ou marcando duas pequenas regiões diametralmente opostas.   Tal achado já havia sido relatado por Zaragoza et al. (2006) e pode correlacionar-se com o caráter frouxo da cápsula, formada por fibrilas radialmente dispostas, como demonstrado em microscopia eletrônica

Zaragoza O, et al. Equatorial ring-like channels in the Cryptococcus neoformans polysaccharide capsule.  FEMS Yeast Res. 2006 Jun;6(4):662-6.

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Com aumento forte (objetiva de imersão), a parede celular destaca-se como estrutura fortemente refringente, sendo às vezes possível distinguir camadas. O interior do fungo contém corpúsculos também refringentes, que brilham ou ficam escuros variando-se o foco micrométrico, e se comportando, portanto, como pequenas lentes.  Admitimos que alguns destes representem vacúolos de lípides. 
Abaixo,  imagens de duas células fúngicas fotografadas em focos levemente diferentes. Combinadas em animações, são vistas no quadro seguinte. Enfatizam o caráter refringente da parede celular e de componentes citoplasmáticos. 
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Nanquim. Fungos em reprodução. 
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Agradecimentos. Caso gentilmente contribuído pelos Drs. Antonio Augusto Roth Vargas,  Marcelo Senna Xavier de Lima, Paulo Roland Kaleff e residentes Marco Aurélio Moscatelli Alvarenga, Cícero Ronaldo Ferreira da Silva, Sinval Malheiros Pinto Neto, e José Alberto Pereira Pires, Hospital Santa Casa de Limeira, Limeira, SP.   Colorações especiais pelo técnico, Sr. Sérgio Roberto Cardoso.  Departamento de Anatomia Patológica, FCM-UNICAMP. 
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Para mais imagens deste caso:
TC, RM Macro, HE Colorações especiais - parafina Colorações especiais - esfregaço Microscopia eletrônica
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