Neupatimagem-UNICAMP

Cerebelo normal (em caso de doença de Lhermitte-Duclos).
2. IH para antígenos neuronais (MAP2, NeuN, NF, SNF)

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Masc. 22 a. Clique para : RM. Neuropatologia do cerebelo : área afetada : HE, LFB-Nissl.
IH : MAP2, NeuN, SNF, NF, cromogranina, GFAP, CD34, Ki67.
Área normal : HE, LFB-Nissl. IH : MAP2, NeuN, NF, SNF, GFAP, S100, CD34.

Destaques da imunohistoquímica para neurônios.

MAP2. Aumento fraco com camadas do córtex cerebelar	Camada molecular. Marcação citoplasmática de neurônios	Células de Purkinje - sempre negativas para MAP2


Camada granulosa - positividade nas células de Golgi, e em parte das células granulosas	NeuN. Positividade restrita aos núcleos das células granulosas	Camada molecular. Negativa para NeuN


Células de Purkinje - sempre negativas para NeuN	Camada granulosa - positividade nas células granulosas, negativo nas de Golgi	NF. Aspecto geral.


Camada molecular. Axônios de neurônios granulosos	Células de Purkinje - negativas para NF, marcação de axônios de células em cesto	SNF. Positividade nos glomérulos cerebelares da camada granulosa

GFAP. Aumento fraco com camadas do córtex cerebelar e substância branca	Camada molecular	Células de Purkinje


Camada granulosa	Substância branca	Astrócitos da camada granulosa. Astrócitos de Bergmann


S-100. Aspecto geral, destacando astrócitos de Bergmann	Camada molecular	Células de Purkinje e astrócitos de Bergmann


Camada granulosa, com positividade nuclear e citoplasmática em astrócitos	Substância branca, com positividade em astrócitos	CD34. Positivo em capilares


Destaques da HE, LFB

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MAP2. MAP2 ou proteína associada a microtúbulos (microtubule associated protein) (para breve texto, clique) marca neurônios (citoplasma do corpo celular e dendritos). Aqui, demonstra os neurônios das camadas molecular e granulosa (nesta, as células granulosas e de Golgi). Curiosamente, as células de Purkinje são negativas, como aliás também para NeuN, outro antígeno considerado específico de neurônios.

MAP2. Camada molecular. Os pequenos corpos celulares dos neurônios e seus dendritos curtos destacam-se elegantemente por MAP2 contra o neurópilo da camada molecular, constituído por axônios das células granulosas e dendritos das células de Purkinje. Para mais detalhes desta camada em material de autópsia usando neurofilamento, clique.

MAP2. Células de Purkinje. As maiores células do córtex cerebelar, situadas entre as camadas molecular e granulosa, são sistematicamente negativas para MAP2.

MAP2. Camada granulosa - células granulosas e de Golgi. Na camada granulosa estão os menores neurônios do sistema nervoso central e periférico, as células granulosas. Seus pequenos núcleos (lembrando até linfócitos) têm cromatina densa e um diminuto nucléolo central. O citoplasma é tão escasso que passa facilmente despercebido. Com MAP2, este citoplasma pode ser marcado como uma fina orla em certos campos (nem todos são positivos). Em meio a estes neurônios, que chamam atenção pela regularidade, observam-se células maiores, com citoplasma bem mais abundante e definido, os neurônios de Golgi. Para mais detalhes desta camada usando neurofilamento e sinaptofisina em material de autópsia, clique.

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NeuN. No córtex cerebelar, o anticorpo NeuN (Neuronal Nuclei, para breve texto, clique) marca núcleos apenas dos neurônios granulosos. Todos neurônios da camada molecular, as células de Purkinje e as de Golgi ficam negativos, bem como núcleos gliais do córtex cerebelar e da substância branca.

NeuN. Camada molecular. Não há neurônios marcados.

NeuN. Células de Purkinje. Todas células observadas foram negativas, assim como para MAP2, NF e SNF (neste material). Em um caso de autópsia, células de Purkinje marcaram-se bem com NF, mas foram só fracamente positivas ou negativas com SNF e NSE.

NeuN. Camada granulosa. Em meio à positividade para neurônios granulosos, as células de Golgi destacam-se pela negatividade. Parece-nos intrigante a especificidade do anticorpo pelos núcleos de um só tipo de neurônio no córtex cerebelar. Embora específico para neurônios, só alguns tipos o expressam. Em estudo do hipocampo humano em que usamos vários anticorpos neuronais, NeuN foi praticamente negativo em todos setores, por isso não o incluímos nos resultados.

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NF (neurofilamento). Proteína de neurofilamento é um filamento intermediário do citoesqueleto expresso por neurônios e seus prolongamentos (dendritos e axônios). Para breve texto, clique. Neste caso de córtex cerebelar normal (em um paciente que em outras áreas apresentava doença de Lhermitte-Duclos), NF demonstrou axônios, sendo proeminentes os axônios em cesto, que se dispõem como gaiola em torno das células de Purkinje. Vários axônios finos são observados na camada molecular, especialmente em sua região profunda; provavelmente pertencem às células granulosas. Corpos celulares não se marcaram. Ver porém um outro estudo com material de autópsia, em que o anticorpo marcou com nitidez os neurônios da camada molecular, as células de Purkinje e as de Golgi). A discrepância é digna de registro e pode refletir condições de fixação, amostra do anticorpo e detalhes do procedimento imunohistoquímico, entre outras variáveis.

NF. Camada molecular.

NF. Células de Purkinje e 'cestos'. As células de Purkinje foram negativas, mas os axônios em cesto ficaram elegantemente demonstrados por NF. Estes axônios pertencem às células em cesto (basket cells), cujos corpos celulares são encontrados na camada molecular e foram negativos no presente material. Ver porém caso de autópsia com positividade tanto para células em cesto como para as de Purkinje. Naquele, os cestos também ficaram proeminentes.

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Sinaptofisina (SNF). Camada granulosa. Aqui observamos o achado clássico do córtex cerebelar com sinaptofisina, uma proteína associada a vesículas sinápticas (para breve texto, clique). A marcação concentra-se em pequenos pontos confluentes ao nível dos glomérulos cerebelares, sinapses complexas entre axônios aferentes ao cerebelo (fibras musgosas ou mossy fibers) e dendritos das células granulosas, com participação de dendritos e axônios das células de Golgi. Como há aí várias sinapses concentradas, o produto de reação é abundante. Em comparação, os corpos celulares das células granulosas e das células de Purkinje são negativos.

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Agradecimentos. Caso do Hospital Santa Casa de Limeira, SP, enviado e gentilmente contribuído pelos Drs. Antonio Augusto Roth Vargas, Marcelo Senna Xavier de Lima, Paulo Roland Kaleff e residentes do Serviço de Neurocirurgia. Preparações imunohistoquímicas pelas técnicas Ana Claudia Sparapani Piaza, Luzia Aparecida Magalhães Ribeiro Reis e Arethusa de Souza. Depto de Anatomia Patológica da FCM-UNICAMP, Campinas, SP.

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Para mais imagens deste caso e texto:
RM	Área afetada, HE LFB-Nissl	IH para MAP2, NeuN, SNF	IH para NF, cromogranina


IH para GFAP, CD34, Ki67	Área normal, HE, LFB-Nissl	IH para MAP2, NeuN, NF, SNF	IH para GFAP, S100 CD34