Neupatimagem-UNICAMP

Ganglioglioma bifrontal supracaloso com componente de neurocitoma central.
7. Microscopia eletrônica - neurônios.

Fem. 64 a. Clique para : página de resumo, breve história clínica e exames de imagem;
Componente de ganglioglioma: macroscopia, esfregaço, parafina HE,
colorações especiais : LFB-Nissl, Masson, Reticulina;
imunohistoquímica para astrócitos : GFAP, VIM; imunohistoquímica para neurônios : MAP2, NF, cromogranina, SNF, tubulina, NeuN; CD34, Ki67, p53;
microscopia eletrônica : neurônios, dendritos, axônios, sinapses, astrócitos, corpos granulosos, vasos.
Componente de neurocitoma central: HE, GFAP, VIM; NF, SNF, cromogranina, MAP2, NeuN; nestina, CD34, Ki67, p53.

Material para microscopia eletrônica deste caso foi obtido da excisão cirúrgica do tumor (e não da biópsia estereotáxica que resultou no diagnóstico inicial de neurocitoma central). Material recebido a fresco foi amostrado como pequenos fragmentos, fixados imediatamente em líquido de Karnovsky. Após algumas horas, estes foram recortados sob lupa a cerca de 1 mm3 para ulterior processamento. Como a fixação foi rápida e no meio ideal, a preservação da ultraestrutura foi satisfatória, permitindo boa visualização de organelas, membranas e sinapses. O estudo revela a enorme complexidade do tumor, que se assemelha notavelmente ao tecido nervoso normal.

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Destaques da microscopia eletrônica.

Neurônios	Sinapses axossomáticas	Retículo endoplasmático rugoso


Rosetas de ribossomos	Mitocôndrias	Vesículas secretoras


Dendritos	Axônios mielínicos	Neurópilo, sinapses axodendríticas


Astrócitos	Corpos granulosos	Capilar


Destaques do esfregaço, parafina HE, colorações especiais, imunohistoquímica. Parte de neurocitoma central.

Neurônios. Neurônios são as células mais facilmente identificáveis em microscopia eletrônica, por características superponíveis às já comentadas em microscopia óptica. Ver HE, LFB-Nissl e imunohistoquímica.

Neurônios.

Esta grande célula é facilmente reconhecível como neurônio com base em seu núcleo ovalado, nucléolo eletrodenso, redondo e proeminente, cromatina frouxa, e amplo citoplasma de limites nítidos. Este faz contato em toda sua volta com perfis de outras células, cuja natureza nem sempre é óbvia. Algumas são sinapses axossomáticas, detalhadas em outros quadros. No citoplasma abundante há mitocôndrias, ribossomos livres, retículo endoplasmático rugoso (RER) (correspondendo aos corpúsculos de Nissl), microtúbulos e filamentos intermediários (neurofilamentos).

Comparação de um neurônio em ME com células de aparência equivalente em microscopia óptica. A cromatina, bem distribuída em ME, é mais esgarçada ou filamentosa em MO, provavelmente por artefatos de retração devidos à inclusão em parafina. Chama a atenção o nucléolo compacto, semelhante em MO e ME. O citoplasma abundante e de limites nítidos demonstra organelas em ME que não são individualizáveis em MO, exceto, por vezes, o retículo endoplasmático rugoso (RER). Este corresponde aos corpúsculos de Nissl e aparece como finos grânulos basófilos (arroxeados ou azulados) em HE e LFB. Para mais detalhes da MO, clique.

Outro neurônio volumoso

com citoplasma abundante e limites nítidos com células vizinhas. A imagem à direita do nucléolo e de tamanho semelhante ao dele pode corresponder a uma pseudoinclusão intranuclear. Para exemplos em HE e VIM, clique. No citoplasma, mitocôndrias, RER e filamentos.

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Outro neurônio.

Este menor que os anteriores. Citoplasma bem delimitado, rico em perfis do RER, ribossomos livres ou em rosetas, e mitocôndrias tumefeitas. Em torno e em íntimo contato com o corpo do neurônio, há numerosos perfis arredondados e irregulares de prolongamentos celulares. O conjunto deles é conhecido como neurópilo, e é essencialmente semelhante ao observado no córtex cerebral normal.

Pequeno neurônio rico em mitocôndrias.

Neurônio multinucleado.

Neurônios multinucleados eram comuns neste ganglioglioma, como em outros já postados no site. São mais fáceis de identificar em microscopia óptica porque os cortes são mais espessos. Ver exemplos em HE e LFB. Na célula ao lado, é possível notar três núcleos, um deles com nucléolo. As organelas e características do citoplasma são as mesmas que para os neurônios mononucleados.

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Sinapses axossomáticas. Sinapses são identificáveis em microscopia eletrônica pela eletrodensidade das membranas em contato. A grande maioria das sinapses são axodendríticas (entre um terminal axonal e um dendrito) ou axossomáticas (entre um terminal axonal e o corpo celular de um neurônio). As axodendríticas são demonstradas em outra página. Aqui mostramos algumas axossomáticas. O corpo celular do neurônio é facilmente identificável pela presença de ribossomos. O terminal axonal pode conter vesículas sinápticas, geralmente do tipo claro (que contêm acetilcolina) e que podem formar aglomerados junto à densidade sináptica. A existência de vesículas é responsável pela positividade da reação imunohistoquímica para sinaptofisina em torno dos corpos celulares dos neurônios. Estes são geralmente negativos para esta proteína participante das vesículas sinápticas.

Correlação

entre imunohistoquímica e microscopia eletrônica. A positividade para sinaptofisina (SNF), uma proteína associada a vesículas sinápticas (para breve texto, clique) concentra-se na periferia dos corpos celulares dos neurônios, onde ocorrem as sinapses axossomáticas. O citoplasma neste exemplo é negativo.

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Retículo endoplasmático rugoso. O retículo endoplasmático rugoso (RER) é uma organela abundante no citoplasma de muitos neurônios. O encontro de RER praticamente define a célula como neurônio. Local da síntese proteica, é tanto mais proeminente quanto maior o corpo celular e mais longo o axônio. Aqui vemos vários exemplos de cisternas do RER pontilhadas de ribossomos na face citoplasmática da cisterna. As proteínas sintetizadas caem na luz da cisterna e são daí dirigidas ao complexo de Golgi para ulterior processamento e destino. O RER é visualizado em microscopia óptica na forma de corpúsculos de Nissl, que aparecem como manchas roxas no citoplasma, coradas pela hematoxilina em HE e por cresil violeta no LFB - Nissl.

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Ribossomos livres e em rosetas. Os ribossomos não associados a cisternas do retículo endoplasmático rugoso ficam livres no citoplasma ou, freqüentemente, formando agrupamentos circulares ou espirais de várias unidades, conhecidas como rosetas de ribossomos (ribosomal rosettes, em inglês). Isto ocorre porque ribossomos se ligam a uma mesma molécula de RNA mensageiro (mRNA) e a transcrevem simultaneamente. O vínculo dos ribossomos com a mesma molécula é que os agrupa em rosetas ou espirais. São de observação comum no citoplasma neuronal. É importante lembrar que ribossomos ou o retículo endoplasmático rugoso só existem no corpo celular ou em dendritos, e nunca são encontrados em axônios ou terminais axonais. O encontro de ribossomos em um perfil é suficiente para excluir que pertença a um axônio.

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Mitocôndrias. Variam em forma e volume em diferentes neurônios. Na maioria estão tumefeitas e têm matriz eletrolucente devido a artefato de retardo da fixação, que leva a entrada de água dentro da organela por falência da cadeia respiratória. O problema é praticamente inevitável em material humano, que é necessariamente fixado por imersão. Fixação perfeita só se obtém por perfusão intravascular de fixador em animais vivos.

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Vesículas secretoras.

Vesículas secretoras de centro denso são observadas no citoplasma de alguns neurônios. Correspondem a proteínas sintetizadas no retículo endoplasmático rugoso, concentradas no complexo de Golgi e destinadas a secreção pela célula. São análogas às observadas em adenomas da hipófise.

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Agradecimentos. Preparações de microscopia eletrônica pelas técnicas Marilúcia Ruggiero Martins e Mayara Rodrigues Linares Silva, Depto de Anatomia Patológica da FCM-UNICAMP. Campinas, SP.

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Para mais imagens deste caso e página de resumo.
TC, RM	Componente de ganglioglioma
TC, RM	Macro, esfregaço, parafina HE	Colorações especiais	Imunohistoquímica - GFAP, VIM.	IH - MAP2, NF


IH - cromogranina, SNF, tubulina, NeuN	IH - CD34, Ki67, p53	Microscopia eletrônica - Neurônios.	ME - dendritos, axônios, neurópilo, sinapses	ME - astrócitos, corpos granulosos, capilar


Componente de neurocitoma central
HE	GFAP, VIM.	NF, SNF, cromogranina	MAP2, NeuN	Nestina, CD34, Ki67, p53