Tumor embrionário com neurópilo abundante e 
rosetas em multicamadas.  3. IH para antígenos neuronais - NF, SNF, MAP2, NeuN
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Fem. 2a 2m.   Clique para TC, RM, macro, HE, destaques da IH, GFAP, VIM, NF, SNF, MAP2, NeuN, EMA, Ki67,, microscopia eletrônica, texto
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NF.   Proteína de neurofilamento (NF) é um filamento intermediário do citoesqueleto expresso por neurônios em seu corpo celular e prolongamentos, dendritos e axônios.  Neste tumor embrionário do SNC, neurofilamento demonstra numerosas células esparsas entre as células neoplásicas que, pela sua topografia e ampla distribuição, foram interpretadas como diferenciação neuronal.  A morfologia das maiores é indiscutivelmente de neurônios. Há, porém, ampla variação da quantidade de citoplasma demonstrada por NF.  Isto indicaria graus diversos de diferenciação neuronal. 
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NF.  Células indiferenciadas.   As células indiferenciadas com apenas núcleos corados em azul não expressam o antígeno. 
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NF.  Diferenciação neuronal incipiente.    Em meio às células indiferenciadas é possível observar-se células pequenas positivas no citoplasma.  Algumas são redondas e outras apresentam prolongamentos citoplasmáticos curtos e rudimentares. O núcleo pode assumir aspecto semelhante ao dos neurônios maduros, com cromatina frouxa e nucléolo evidente. As células são primitivas demais para serem pré-existentes. São consideradas exemplos de diferenciação neuronal incipiente em um tumor totipotente, que pode originar astrócitos (ver GFAP, VIM), neurônios e células ependimárias (ver EMA). 
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NF.  Diferenciação neuronal avançada.   Estas células mostram diferenciação neuronal mais evidente e são facilmente reconhecíveis pelo formato piramidal, prolongamentos dendríticos e núcleo com nucléolo. Mais uma vez, a disposição casual e anárquica fala fortemente contra sua pré-existência.  Vale notar também a grande quantidade de prolongamentos celulares NF positivos, presumivelmente axônios, que permeia o neurópilo.  Dado o grande volume do tumor, é extremamente improvável que pertençam à substância branca original. O corolário é que devem corresponder às células tumorais com diferenciação neuronal. 
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SNF.   Sinaptofisina, uma proteína participante de vesículas sinápticas (para breve texto, clique), marcou extensamente este tumor primitivo nas áreas que na HE se assemelham a neurópilo. As áreas de células indiferenciadas, caracterizadas por núcleos azuis e escasso citoplasma, são negativas.  A riqueza da marcação sugere abundância de sinapses ou de prolongamentos celulares portadores da proteína. 
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SNF.  Células indiferenciadas.    Grupamentos de células indiferenciadas e rosetas de Flexner são negativas para sinaptofisina.   Em algumas destas chama a atenção um grande número de células em apoptose. Os fragmentos nucleares destacam-se em azul escuro. 
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SNF.  Diferenciação neuronal avançada.    Neurônios de aspecto maduro derivados de diferenciação das células tumorais destacam-se devido aos botões sinápticos que decoram sua membrana externa, realçando o contorno do corpo celular e dendritos. 
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Corpúsculos SNF-positivos.    Em poucas áreas observam-se coleções destes corpúsculos fortemente SNF positivos. Não foram observados correspondentes em HE ou outras reações imunohistoquímicas. Poderiam corresponder a acúmulos de material intraaxonal, como as 'bolas de retração de Cajal' em axônios seccionados, ou aos 'axônios em contas de rosário' vistos em tumores que infiltram o tecido nervoso. 
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MAP2.    Proteína associada a microtúbulos (microtubule associated protein, para breve texto clique) é um dos melhores anticorpos para estudar a morfologia e arquitetura de neurônios.  A marcação é citoplasmática (núcleos negativos) no corpo celular e porção proximal dos dendritos.  Aqui, endossa os resultados de outros marcadores neuronais, como NF, SNF e NeuN.  As células indiferenciadas são negativas. Em meio a elas é possível discernir células imaturas, com diferenciação neuronal incipiente, citoplasma escasso sem prolongamentos ou estes são curtos. 
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MAP2.  Células indiferenciadas e diferenciação neuronal incipiente. 
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MAP2.  Diferenciação neuronal avançada.   Aqui as células adquirem prolongamentos e o contorno se aproxima do de neurônios maduros, geralmente células piramidais. Nucléolos tendem a ser mais evidentes. 
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NeuN.   NeuN (neuronal nuclei, para breve texto clique), um anticorpo específico para neurônios maduros, marca neurônios no córtex cerebral adjacente ao tumor.  Na foto abaixo, observam-se os neurônios em cima, com positividade nuclear e citoplasmática. As células neoplásicas avançam das camadas inferiores, sem limite nítido.  A marcação dos neurônios corticais serve de controle interno positivo para a reação. 
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NeuN. Infiltração cortical.   Os neurônios piramidais do córtex são aqui vistos em meio às células neoplásicas. 
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NeuN. Diferenciação neuronal no tumor.     Áreas profundas do tumor, longe do córtex cerebral, apresentam células esparsas positivas para NeuN, na maioria só no citoplasma. No córtex, a marcação é geralmente nuclear e citoplasmática.  Estas células foram interpretadas como diferenciação neuronal das células tumorais.  A topografia delas, dispersas pelo tumor e distantes da superfície, elimina a possibilidade de serem pré-existentes.  O achado corrobora os de outros marcadores. 
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Agradecimentos.   Caso contribuído pelo Centro Infantil Boldrini, de Campinas, SP.  Cortes histológicos - Aparecido Paulo de Moraes, Irineu Mantovanelli Neto.   Imunohistoquímica:  Adriana Worschech, Isabella Guize (Boldrini);  Ana Claudia Sparapani Piaza, Luzia Aparecida Magalhães Ribeiro Reis e Arethusa de Souza (Depto de Anatomia Patológica da FCM-UNICAMP), Campinas, SP. 
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 Para mais imagens deste caso: TC, RM Macro, HE, texto
GFAP, VIM NF, SNF, MAP2, NeuN EMA, Ki-67 Microscopia eletrônica
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