Paracoccidioidomicose  linfonodal
5 -  Microscopia  eletrônica
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Nas páginas anteriores:

1 - esfregaço e cortes de congelação do linfonodo a fresco, 
2 - cortes de parafina do linfonodo corados por HE
3 - método de Grocott de impregnação argêntica para fungos
4 - Grocott + hematoxilinareação do PAS  e 
    cortes semifinos em Araldite corados por azul de toluidina.


 
FUNGOS   JOVENS
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Fungos vivos e mortos. 

Como já notado em microscopia óptica, os fungos encontravam-se em parte fagocitados por gigantócitos. Formas viáveis e degeneradas eram vistas na mesma célula.  O aspecto basófilo em HE dos fungos viáveis correspondia em ME a células eletrodensas, com núcleos e organelas citoplasmáticas de aspecto bem preservado.  Os fungos degenerados, que tinham aspecto róseo em HE, eram eletrolucentes e desestruturados em ME , sem organelas ou evidência de funções vitais. 

Abaixo, montagem de imagens análogas de HE e azul de toluidina para ilustrar fungos viáveis e degenerados. 

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Fungos jovens. 

Os fungos viáveis tinham aspecto eletrodenso, observando-se vários núcleos, mitocôndrias, vacúolos eletrolucentes, presumivelmente de lípides, retículo endoplasmático simples, e citoplasma fundamental rico em partículas eletrodensas (que interpretamos como glicogênio, ribossomos, ou ambos). 

As mitocôndrias do fungo têm estrutura simplificada, com apenas uma ou duas cristas. O retículo endoplasmático é representado por poucos canais. Entre as organelas há grande quantidade de grânulos eletrodensos, que poderiam representar ribossomos ou glicogênio. Os núcleos são reconhecíveis pela membrana de duplo contorno com cromatina de densidade variável. 

FUNGOS  EM  BROTAMENTO
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Fungos  em  brotamento. 

Foram observados vários, mas poucos tinham a estrutura viável, rica em organelas, notada acima.  A grande maioria parecia degenerada ou necrótica, sugerindo que os fungos morreram durante a reprodução, por ação medicamentosa ou das reações de defesa do organismo. 

O exemplar ao lado é o que tinha organelas melhor preservadas. Infelizmente, a imagem está prejudicada por precipitados de citrato de chumbo (usado na contrastação do espécime). 

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Cinco brotos próximos, achado raro em microscopia eletrônica devido à fina espessura dos cortes (0,1 mm, ou um décimo dos cortes corados por azul de toluidina, ou 1/50 dos cortes de parafina habituais).  Poder-se-ia pensar que é um parasita ativo e saudável. Contudo, não se observam núcleos nem organelas, o citoplasma é claro e homogêneo.  Na inserção, um fungo corado por azul de toluidina que teria aspecto semelhante em ME. 
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Pertuitos da parede celular por onde passam o núcleo e citoplasma da célula-mãe para constituir os novos fungos.  Na inserção, na impregnação de Grocott, os pertuitos são notados como minúsculos orifícios. Notar a diferença da espessura da parede celular  da célula-mãe e das células-filhas.  Tanto uma como outras parecem estar necróticas, por não serem evidenciadas organelas. 

 
FUNGOS    NECRÓTICOS.  Vários outros exemplares de fungos degenerados ou necróticos são mostrados nas figuras seguintes. 
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RESTOS DE PAREDES CELULARES DE FUNGOS, PENETRADAS  PELO  CITOPLASMA DE MACRÓFAGOS.  Algumas células fúngicas, que a primeira vista parecem vivas, são paredes celulares vazias preenchidas pelo citoplasma das células que as fagocitaram (macrófagos ou gigantócitos). 
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A eletrodensidade e o aspecto das organelas são os mesmos dentro e fora do remanescente da parede celular . É possível observar o pertuito por onde se dá a penetração do citoplasma. 
Outro exemplo de parede celular de fungo 'colonizada' por lingüetas de citoplasma do macrófago. Um ponto de penetração está mostrado com seta, mas certamente devia haver outros fora deste plano. 

 
CÉLULAS  INFLAMATÓRIAS
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Um plasmócito destaca-se pelo seu núcleo excêntrico, com grumos densos de cromatina. O citoplasma é riquíssimo em retículo endoplasmático rugoso, com cisternas arranjadas em curvas concêntricas, à maneira de arquibancada.
Um macrófago  chama a atenção pelo seu citoplasma rico em organelas, com material fagocitado (no caso, um fungo), e contorno irregular com vários pseudópodos.  O fungo tem aspecto viável com núcleo e mitocôndrias. 
Outro exemplo, com macrófagos em meio a feixes de fibras colágenas. O macrófago do centro contém um fungo fagocitado que, em aumento forte, mostra várias mitocôndrias de aspecto normal. 
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Agradecimentos às técnicas Sras. Marilúcia Ruggiero Martins e Geralda Domiciano de Pádua pelas preparações. 
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Para mais imagens deste caso:  Esfregaço e congelação,  HE Parafina, HE
Grocott  Grocott + Hematoxilina,
PAS, Azul Tol
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