Paracoccidioidomicose   linfonodal - 
4. Grocott + hematoxilina, PAS, 
azul de toluidina
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Nas páginas anteriores:

1 - esfregaço e cortes de congelação do linfonodo a fresco, 
2 - cortes de parafina do linfonodo corados por HE
3 - método de Grocott de impregnação argêntica para fungos

Nas páginas seguintes: 
5 - microscopia eletrônica

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Grocott + Hematoxilina. 

A contracoloração com hematoxilina depois da impregnação pela prata permite visualizar os outros elementos do tecido. Mostra que os folículos linfóides com centros germinativos estão praticamente isentos de parasitas, que se concentram nos seios linfáticos onde há macrófagos. 

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Folículos linfóides e centros germinativos. Aparecem como imagens mais claras, sem parasitas. Isto talvez se deva à alta densidade das células linfóides nestas estruturas. 
Fibrose. O processo inflamatório crônico leva a fibrose do linfonodo. O Grocott, se a impregnação é mais prolongada, cora as fibras colágenas em marrom. 
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Os fungos são abundantes em macrófagos e gigantócitos, no interior dos quais se reproduzem. Alguns gigantócitos contêm aglomerados de parasitas, muitas vezes apenas cascas (paredes celulares) vazias e colapsadas, de fungos que já se reproduziram. 

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PAS.   A parede celular dos fungos não se corou, apenas o citoplasma (possivelmente por conter glicogênio?). 

Azul  de  toluidina em material incluído em Araldite. 

Estes cortes são feitos após processamento do material para microscopia eletrônica e têm cerca de 1 mm de espessura. São corados por azul de toluidina a quente e visualizados diretamente ao microscópio óptico, sem montagem com lamínula. Aqui foram fotografados com objetiva de imersão. 

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Abaixo, as etapas da reprodução.  Os fungos jovens e viáveis têm conteúdo denso e fortemente corado em azul, que corresponde em microscopia eletrônica a núcleos, e citoplasma rico em ribossomos e mitocôndrias. Aparentemente, forma-se um vacúolo central que se expande à medida que os esporos se formam. Estes são também densamente azuis. 
Fungos mortos têm conteúdo de tonalidade clara ou aparecem vazios, devido à perda de organelas citoplasmáticas. Paredes celulares dobradas em cuia são comuns no citoplasma de macrófagos.   Ver mais detalhes em microscopia eletrônica
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Agradecimentos às técnicas Srta. Priscila Duarte (Grocott, PAS) e Sras. Marilúcia Ruggiero Martins e Geralda Domiciano de Pádua (Azul de Toluidina) pelas preparações. 
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Para mais imagens deste caso:  Esfregaço e congelação,  HE Parafina, HE
Grocott  Microscopia eletrônica
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