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3 - Método de Grocott para fungos |
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3 - Método de Grocott para fungos |
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| Nas páginas
anteriores:
1 - esfregaço e cortes de congelação do linfonodo a fresco. 2 - cortes de parafina do linfonodo corados por HE. Nas páginas
seguintes:
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| O método de Grocott, na nossa experiência, produz as melhores imagens do Paracoccidioides brasiliensis. É uma impregnação pela prata em cortes de parafina, precedida por oxidação por ácido crômico, cuja técnica pode ser consultada. A impregnação é em estufa a 60º C e é lenta, podendo ser ser acompanhada ao microscópio e interrompida quando o resultado for satisfatório (tipicamente 20 a 30 minutos). Excesso de tempo leva a impregnação de outros elementos, como colágeno e núcleos, perdendo-se a delicadeza e especificidade da reação. Pode ou não ser realizada contracoloração com hematoxilina. |
| Sem contra- coloração, o tecido de fundo não fica visível, mas o método dá boa idéia da quantidade de fungos. |  |
| A impregnação mostra os parasitas em marrom. É corada apenas a parede celular do fungo, constituída de polissacarídeos. Aqui os vemos em todos os estágios, jovens, em reprodução e senescentes. |  |
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Roda
de leme
Grocott feito com impregnação leve é particularmente adequado para detalhes da morfologia dos fungos, como o brotamento múltiplo em roda de leme, ou criptoesporulação. |
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| O brotamento duplo em 'cabeça de Mickey' era pouco freqüente neste espécime, sendo largamente sobrepujado pelo 'em roda de leme'. Neste último, às vezes, do próprio esporo saía um novo broto, que chamamos de esporos 'secundários'. Este alongamento dos esporos era especialmente intenso no aspecto em hifas (ou pseudohifas) demonstrado no quadro seguinte. | |
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| Brotamento lembrando hifas. A forma mais comum de brotamento múltiplo é a de esporos redondos. Há, porém, vários exemplos em que os brotos são alongados lembrando hifas, ou esporos secundários e terciários em seqüência, que adquirem aspecto em contas de rosário. | |
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| Cortes tangenciais pela parede celular. No processo de brotamento múltiplo, aparecem pertuitos na parede celular, por onde passa o protoplasma da célula-mãe para formar os esporos. Os diminutos orifícios são demonstrados com vantagem na impregnação de Grocott. Entre estes, a parede celular se fragmenta à maneira de 'casca de tartaruga', ficando com placas mais espessas e linhas divisórias delgadas. A variação da espessura da parede celular em corte transversal corresponde ao aspecto em tartaruga no corte tangencial. Presumivelmente são fungos velhos, que já se reproduziram. | |
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| Paredes celulares vazias e em colapso. São grandes e sem conteúdo. A espessura da parede celular é irregular, deixando às vezes ver os pertuitos. Não raro afundam, tomando aspecto em cuia, bola murcha ou em crescente. | |
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| Figuras
demais?
O grande número de ilustrações nestas páginas é proposital. Consideramos uma pena não incluí-las, porque cada imagem de brotamento é única. Uma pequena obra de arte da natureza, ainda que de trágicas conseqüências para o infeliz hospedeiro. |
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| Uma
página como estas, com dezenas de imagens digitais
a custo zero e livremente disponíveis a qualquer interessado é,
a nosso ver, um dos frutos desta revolução chamada internet.
A impressão de uma única plate em cores, contendo
quem sabe seis fotos, numa revista em papel, custaria em média mil
dólares. Cada imagem jpg como estas, que tem
em média 60 kB e 640 x 480 pixels, praticamente preenche uma tela
de computador. Fica adormecida, com milhares de outras, no disco
rígido de um servidor. Sistemas de busca varrem a rede, localizam-nas
quase instantaneamente e as veiculam aos solicitantes em segundos, em qualquer
ponto do planeta, a qualquer hora do dia ou da noite. Assim, aos
poucos, vai tomando forma a mais vasta enciclopédia da história
da humanidade.
Que diria Gutenberg, se à vida voltasse? |
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| Agradecimentos à técnica Srta. Priscila Duarte pelas preparações. |
| Para mais imagens deste caso: | Esfregaço e congelação, HE | Parafina, HE |
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| Grocott
+ Hematoxilina,
PAS, Azul Tol |
Microscopia eletrônica | |
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